Объем фильтрата водой доводят до 100 мл. Отбирают в коническую колбу 50 мл фильтрата, подкисляют 15% раствором, вносят 100 мг активированного угля. Смесь кипятят 5 мин на электрической плитке под тягой при помешивании и отфильтровывают под вакуумом через пористый стеклянный фильтр или через соответствующий стеклянный фильтр со слоем асбеста. Приемную колбу заменяют другой и через тот же фильтр 5 раз пропускают нагретый до кипения 3% раствор аммиака в 70% спирте для промывки фильтра и извлечения Фотиевой кислоты из угля. Всего для экстракции берут 70 мл жидкости: на первую — 20 мл, на вторую и третью — по 15 мл, на четвертую и пятую — по 10 мл. Соединенные вместе экстракты помещают в перегонную колбу со стеклянным шлифом и отгоняют до объема 10- 15 мл. Полученный остаток подкисляют 2% раствором и добавляют по каплям 4% раствор до появления разовой окраски не исчезающей 10 мин. Добавляют по каплям 3% раствор для удаления избытка и 15% раствором доводят до 4,0—4,5 и водой до общего объема 20 мл. Жидкость фильтруют и измеряют интенсивность флуоресценции в области максимума со светофильтром 470 нм на приборе. Параллельно с этим определяют интенсивность флуоресценции стандартного раствора кислоты. В 10 мл реакцию раствора доводят и обрабатывают его растворами, как в исследуемой пробе. Установив, доводят водой объем раствора до 20 мл и измеряют его флуоресценцию. В 1 мл полученного раствора содержится 1 мкг Фотиевой кислоты. Холостое определение для проверки чистоты реактивов (некоторые реактивы обладают флуоресценцией) проводят, повторяя все этапы основного исследования, но только вместо молока в колбу на 100 мл наливают около 80 мл воды, затем поступают так, как при исследовании молока.