Оптическую плотность в полученном окрашенном спиртовом растворе витамина находят с помощью, применяя синий светофильтр с максимумом пропускания в области спектра 470 нм. Калибровочный график составляют по серии стандартных спиртовых растворов с возрастающей концентрацией в пределах от 100 до 400 мкг в 1 мл. Содержащийся в этих растворах окисляют азотной кислотой и по интенсивности окрашенного продукта реакции находят величину оптической плотности для каждого раствора. В качестве контрольного раствора применяют абсолютный этиловый спирт, 5 мл которого нагревают так же, как исследуемый раствор с 1 мл концентрированной азотной кислоты в течение 3 мин. на кипящей водяной бане. После охлаждения реакционную смесь разбавляют абсолютным спиртом до того конечного объема, до которого была доведена проба исследуемого раствора. Теоретическое обоснование. Кислые красители при смешивании с молоком ниже изоэлектрической точки казеина дают соединения с основными группами белков и, образуя нерастворимый комплекс с ними, коагулируют. Количество связанного красителя пропорционально количеству белка в молоке. Определение белков в молоке основано на определении оптической плотности раствора краски до и после коагуляции белков. Методика определения. Перед использованием красителей определяют оптическую плотность их растворов и в соответствии с этим регулируют дозировку. Средняя способность связывания красок на 1 мг белка. Количество связываемого красителя белками зависит от раствора. Он должен быть одинаков при определении во всех пробах, поэтому красители растворяют в буферных растворах.