Холостой опыт проводят так же, применяя вместо 5 мл раствора 5 мл воды. Для построения калибровочного графика в четыре мерные колбочки на 25 мл калиброванной пипеткой вливают 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 мл раствора, что соответствуют 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 и 1000 мкг фосфора. Затем добавляют в каждую колбу в тех же количествах, что при опыте по 2 мл хлорной кислоты, 2 мл амидола и 1 мл аммония, доводят водой до 25 мл, перемешивают и через 15 мин измеряют оптическую плотность. По оси абсцисс откладывают содержание фосфора в мкг, по оси ординат — оптическую плотность. Разница между параллельными определениями не должна превышать 0,003 г фосфора в 100 г молока. колбу для удаления воды и продолжают кипятить 30 мин для полного освобождения от перекиси водорода. Охлажденную жидкость переливают в мерную колбу на 50 мл, обмывают первую колбу водой, сливая ее в мерную колбу. Объем доливают водой до метки. 1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу на 50 мл, добавляют 25 мл воды и 20 мл раствора. Колбу помещают в кипящую баню на 15 мин для установления постоянной окраски. Затем раствор охлаждают до 20° С и определяют оптическую плотность (не позже чем через 1 ч по приготовлении раствора) при длине волны 700 нм, сравнивая показания с холостой пробой.