Серный эфир отгоняют на водяной бане. Оставшийся в колбе не омыляемый остаток растворяют в 3—5 мл хлороформа. Приготовленный раствор витамина в хлороформе. Для этого микропипеткой отбирают 0,2 мл испытуемого раствора и вливают в пробирку из бесцветного стекла диаметром 1 см и высотой 6 см. В эту же пробирку добавляют капли уксусного ангидрида и 2 мл раствора треххлористой сурьмы и не позднее, чем через 5—10 сек. Появившуюся окраску раствора сравнивают с окраской типовых растворов в компараторе или в колориметре. В пробирках-эталонах, имеющих диаметр 1 см и высоту 6 см, содержатся типовые растворы, являющиеся водными растворами основного раствора сернокислой меди и азотнокислого кобальта в 500 мл воды. Из основного раствора путем прибавления воды приготовляют эталоны. Пробирки-эталоны должны быть закрыты пробками с прокладками из пергаментной бумаги и залиты менделеевской замазкой. Содержание витамина в испытуемом растворе будет соответствовать числу синих единиц, обозначенному на совпавшей по окраске пробирке-эталоне. Если окраска испытуемого раствора лежит между окрасками двух смежных пробирок-эталонов, берут среднее из значений синих единиц, обозначенных на этих пробирках. Наиболее точные результаты получают раствора в пределах от 4 до 6 синих единиц. Концентрированные растворы разбавляют соответствующим образом хлороформом и проводят определение повторно в пределах указанных единиц.