В каждую колбу прибавляют последовательно те же реактивы, в тех же количествах, как выше. Объем доводят водой до метки, перемешивают. Оптическую плотность растворов определяют от самого слабого с таким расчетом, чтобы каждое исследование проводить точно через 30 мин после внесения реактивов. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество фосфора, по оси ординат показания оптической плотности.Для холостого опыта в колбу на 50 мл вносят только реактивы в тех же количествах и доводят водой до метки. Появление едва заметного окрашивания не мешает определению При появлении интенсивного окрашивания реактивы необходимо заменить. Количество фосфора в сыворотке. В колбу на 50 мл отвешивают 5 мл молока, разводят 25 мл воды, доводят до метки раствором 25% кислоты, охлажденной до 4—5° С, перемешивают, помещают на 30 мин на лед и фильтруют. Фильтрат должен быть прозрачным. 3 мл фильтрата сжигают, определяют и вычисляют содержание фосфора как при определении содержания общего фосфора. Количество фосфора в растворимых солях фосфорной кислоты. 15 мл фильтрата после осаждения белков трихлоруксусной кислотой нейтрализуют в пробирке на 50 мл с фенолфталеином насыщенным раствором до разового окрашивания. Добавляют 2 мл 20% уксуснокислого бария, перемешивают и пробирку, ставят на лед на 20 мин. Центрифугируют 10 мин. Жидкость сливают, осадок промывают 10 мл 1% раствора уксуснокислого бария и снова центрифугируют. Затем сливают жидкость, осадок растворяют, добавляя 1—2 капли концентрированной и 10 мл воды. Содержимое пробирки переводят в мерную колбу на 50 мл, ополаскивают пробирку водой, которую вливают в ту же колбу и доводят до метки водой.