Растворы красителей периодически следует проверять. Необходимо иметь в виду, что в молоке с повышенной кислотностью результаты получаются ниже. Перед каждым последующим определением ополаскивают кювету тем раствором, исследование которого будут производить. При исследовании подряд нескольких образцов следует периодически проверять показания оптической плотности по дистиллированной воде. Отклонение оптической плотности от нулевой точки указывает на загрязненность кюветы. В колбу или пробирку на 50 мл (если центрифугируют) отмеривают 1 мл хорошо перемешанного молока, приливают 20 мл раствора. Через 30 сек после смешения осадок отделяют фильтрованием или центрифугированием в течение 5 мин (1500—2500 об/мин). В пробирку вносят 1,5 мл молока, приливают 25 мл раствора. Пробирку закрывают пробкой и взбалтывают содержимое в течение 15 сек. Затем выдерживают не менее 30 мин в штативе, снова взбалтывают. Нерастворимый осадок белок-краситель не всегда отделяется полностью при центрифугировании, поэтому его отделяют только фильтрованием. Фильтруют раствор, пользуясь воронкой диаметром 7 см и бумажным фильтром диаметром 11 см.Оптическую плотность фильтрата, пользуясь светофильтром с длиной волны 475 нм. Содержание белка в процентах находят по калибровочному графику. Построение калибровочного графика. В нескольких пробах молока определяют содержание белков. Затем в тех же пробах определяют способность красителей связывать белки по описанным методикам. По полученным данным строят график в зависимости от интенсивности окраски или фильтрата от содержания белка в молоке. По оси абсцисс наносят данные процентного содержания белка в молоке, по оси ординат — соответствующую найденную оптическую плотность. Для построения калибровочного графика достаточно нанести две точки и их соединить прямой линией.