Для построения калибровочного графика применяют производное витамина — химически чистый кристаллический эфир, растворенный в хлопковом масле и расфасованный в ампулах с содержанием 1500 и. е. витамина в 1 г масла. Содержимое ампулы растворяют в 15 мл хлороформа и получают раствор, в 1 мл которого содержится 100 и. е. витамина. Из этого раствора готовят 5—6 стандартных разведений в хлороформе с меньшим содержанием витамина, чтобы их отсчеты по шкале барабана укладывались в пределах 40—65 делений шкалы. Прибор устанавливают в рабочее положение подведением стрелки гальванометра к нулевой по раствору треххлористой сурьмы с попеременным использованием двух кювет с одинаковым пропусканием лучей, причем раствор треххлористой сурьмы вносят в обе кюветы. Достигнув рабочего положения, в одну из кювет прибора вносят точно отмеренные 0,5 мл приготовленного стандартного раствора, 2—3 капли ацетил хлорида, вставляют кювету в гнездо колориметра, быстро приливают 4.5 мл раствора треххлористой сурьмы и показания отмечают не позднее, чем через 5—10 сек от момента внесения треххлористой сурьмы. Интенсивность синей окраски определяют при красном светофильтре, имеющем максимум пропускания при 620 нм. Такое же определение проводят со вторым стандартным раствором, с третьим и т. д.