Для построения калибровочного графика 76,4712 г химически растворяют в воде в мерной колбе на 1 л. Этот раствор 0,260 М по лимонной кислоте содержит 50 мг в 1 мл. Раствор должен приготовляться свежим каждый месяц и сохраняться при температуре 0° С. Для построения калибровочного графика 5 мл полученного основного раствора разводят водой в мерной колбе на 1 л; 1 мл такого раствора содержит 250 мкг лимонной кислоты.В пробирки вносят микропипеткой 1; 0,8; 0,6; 0,4 и 0,2 мл стандартного раствора и в последнюю 1 мл воды. Объем жидкости во всех пробирках доводят водой до 1 мл, содержание лимонной кислоты составляет в пробирках 0,25; 0,20; 0,15; 0,10 и 0,05 мкг. В каждую пробирку вносят 1,3 мл пиридина и после интенсивного смешивания 5,7 мл уксусного ангидрида. Сильно встряхивают и помещают пробирки в водяную баню при температуре 32° С. Окрашивание завершается через 30 мин и сохраняется по крайней мере в течение 30 мин. Определяют оптическую плотность этих растворов при 420 нм и по полученным данным строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс содержание лимонной кислоты (в мкг), а по оси ординат — показания прибора. Пробу молока обезжиривают центрифугированием; 5—10 мл молока разводят водой в мерной колбе на 100 мл. При содержании лимонной кислоты 0,2% в 1 мл приготовленного раствора будет содержаться 100— 200 мкг. К 1 мл разведенного молока приливают пипеткой 1,3 мл пиридина, встряхивают, приливают 5,7 мл уксусного ангидрида, встряхивают. Пробирку помещают в водяную баню при температуре 32° С и выдерживают 30 мин. Не охлаждая содержимого пробирки, производят измерение при 420 нм. Установку прибора на 0 делают по дистиллированной воде.