Колбу закрывают пробкой и помещают в водяную баню 2° С на 2 мин, вкладывая полоску бумаги между пробкой и горлом колбы. Затем содержимое немедленно охлаждают до температуры 18—20° С, погружая колбу на 3—4 мин в воду. Измеряют оптическую плотность раствора в спектрофотометре при 510 нм в кювете 1 см. Холостой опыт проводят таким же образом, но исключая жир. Вычитают эту величину из первой. После охлаждения до температуры 18- 20° С в колбу вносят 10 мл 4% спиртового раствора едкого кали и доводят до метки абсолютным этиловым спиртом. Содержимое колбы встряхивают и оставляют на 10 мин. Спектрофотометрические измерения производят на спектрофотометре в кюветах с толщиной слоя 1 см при длине воли 430—460 нм. Перед анализом доводят температуру молока до 2°С и тщательно перемешивают. Если жир не распределяется равномерно, нагревают пробу до 40° С, осторожно перемешивают и охлаждают до 2°С. Затем 10 г молока в фарфоровой или кварцевой чашке выпаривают на кипящей водяной бане досуха, ожигают в муфельной печи при температуре 500—550° С до получения белой золы. Золу охлаждают, чашку закрывают часовым стеклом. Содержимое растворяют в 2—3 мл 1 н. соляной кислоты, разводят водой и переносят мерную колбу на 100 мл, перемешивают, фильтруют. 10 мл фильтрата переносят в другую мерную колбу на 100 мл, доводят водой до метки. 5 мл раствора переносят в мерную колбу на 25 мл, добавляют 2 мл хлорной кислоты 2 мл раствора амидола (реактив 90), 1 мл раствора.