Остаток растворяют в хлороформе с таким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержалось не менее 100 и не более 2000 и. е. витамина Б. Из полученного раствора отбирают 1 мл в кювету фотоколориметра, туда же добавляют три капли, 6 мл раствора треххлористой сурьмы. Точно через 4 мин. интенсивность окраски измеряют в фотоколориметре со светофильтром 500 нм. В качестве контроля для установки прибора на нуль используют раствор из 1 мл хлороформа, 6 мл раствора треххлористой сурьмы и капель. При составлении калибровочного графика пользуются серией растворов кальциферола в хлороформе, содержащих в 1 мл от 200 до 1000 и. е. витамина Б. Основной раствор готовят, растворяя кальциферол в этиловом спирте, так как раствор в хлороформе неустойчив. 10 мг химически чистого кальциферола растворяют в 100 мл спирта. В 1 мл полученного спиртового раствора должно содержаться по расчету. В колбу емкостью 250 мл вносят 100 мл молока, приливают 25 мл 60% водного раствора КОН, 20 мл 96% этилового спирта и 2 ч омыляют с обратным холодильником на кипящей водяной бане. Раствор охлаждают, разбавляют 20 мл воды и переносят количественно в делительную воронку, в которой производят извлечение не омыляемой фракции эфиром. На первую экстракцию берут 50 мл, а на две последующие—по 25 мл эфира.